肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）使用說明書

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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）

商品名稱：Binax NOW^® Streptococcus pneumoniae Test

【包裝規(guī)格】22人份/盒。

【預(yù)期用途】

肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種體外快速免疫層析（ICT）試驗，用于檢測肺炎病人尿液和腦膜炎病人腦脊液（CSF）中的肺炎鏈球菌抗原，與培養(yǎng)等其他方法結(jié)合，用于肺炎球菌性肺炎和肺炎球菌性腦膜炎的輔助診斷。

肺炎鏈球菌是社區(qū)獲得性肺炎的主因，并且可能是不明原因社區(qū)獲得性肺炎的重要致病原^{1, 2}。肺炎球菌性肺炎的病死率高達(dá)30%，這取決于菌血癥、年齡和潛在性疾病^{1, 3}。如果未得到正確診斷和治療，肺炎鏈球菌感染可導(dǎo)致菌血癥、腦膜炎、心包炎、膿胸、暴發(fā)性紫癜、心內(nèi)膜炎和/或關(guān)節(jié)炎^{4, 5}。

肺炎球菌性腦膜炎常導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的腦損傷或腦死亡，它既可作為其他肺炎球菌感染的并發(fā)癥出現(xiàn)，也可單獨出現(xiàn)⁶。各個年齡段人群均可感染，但更常見于5歲以下兒童、青少年和老年人⁷。病程進(jìn)展快速，數(shù)小時內(nèi)可從輕度疾病轉(zhuǎn)為昏迷，這就使得即刻做出診斷，立即動用抗菌素進(jìn)行治療顯得尤為重要。盡管采用了適當(dāng)?shù)目股刂委煄滋旌筮€是會有20%-30%的肺炎球菌性腦膜炎病人會死掉⁶。病死率在小兒和高齡病人中甚至更高⁶。

Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）為肺炎球菌性肺炎的診斷提供了一種簡便快速的診斷方法，該方法所用檢測樣品為尿液，尿液的收集、貯存和運輸都非常方便，該實驗通過對腦脊液進(jìn)行檢測也可對肺炎球菌性腦膜炎做出及時高度準(zhǔn)確的診斷。 

【檢驗原理】

肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種薄膜免疫層析試驗，用于檢測人類尿液和腦脊液中肺炎球菌的可溶性抗原。兔抗肺炎鏈球菌抗體被吸附到硝酸纖維素膜上作為樣本線，對照抗體作為另一條線吸附到同一膜上。結(jié)合有可視粒子的兔抗肺炎鏈球菌抗體和抗種抗體干燥結(jié)合到惰性纖維支持物上，形成的結(jié)合物墊和帶條紋的膜結(jié)合到一起組成檢測條。檢測條和放拭子標(biāo)本的孔位于一個書形鉸鏈狀檢測卡的兩側(cè)。 

試驗時，將拭子浸入標(biāo)本中（尿液或腦脊液），取出，然后插入檢測卡中，從滴瓶中加入A試劑（一種緩沖液），將檢測卡閉合，使樣本和檢測條相觸。樣本中存在的肺炎球菌抗原與抗肺炎鏈球菌抗體結(jié)合物結(jié)合，形成的抗原結(jié)合物復(fù)合物被固定的抗肺炎鏈球菌抗體捕獲，形成樣本線。固定的對照抗體捕獲種屬抗體結(jié)合物，形成對照線。 

試驗結(jié)果可通過紫紅色線的出現(xiàn)與否來解釋。陽性結(jié)果（取決于標(biāo)本中存在的抗原濃度）在15分鐘讀數(shù)時，會檢測出樣本線和對照線。陰性結(jié)果，15分鐘讀數(shù)時只出現(xiàn)對照線，表示標(biāo)本中未檢測到肺炎鏈球菌抗原。如果對照線未出現(xiàn)，不管標(biāo)本線出現(xiàn)與否，都視為無效結(jié)果。

【主要組成成分】

 = 1 \* GB3 ① 檢測卡       包被有純化的兔抗肺炎鏈球菌C-多糖抗體、用專門方法結(jié)合到抗肺炎鏈球菌抗體上的膠體金粒子、雞IgY、用專門方法結(jié)合到驢抗雞抗體上的膠體金粒子

 = 2 \* GB3 ② A試劑        枸椽酸鹽/帶有十二烷基磺酸鈉的磷酸鹽緩沖液，吐溫^®20，疊氮鈉。 

 = 3 \* GB3 ③ 樣本拭子     于Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）（不接觸人體，用于蘸取已經(jīng)采集好的尿液或腦脊液）。不要使用其他拭子。

 = 4 \* GB3 ④ 陽性對照拭子  加熱滅活的肺炎鏈球菌抗原干燥結(jié)合到拭子上

 = 5 \* GB3 ⑤ 陰性對照拭子  肺炎鏈球菌陰性拭子

【儲存條件及有效期】

試劑盒儲存于2-30℃，有效期為24個月。

【樣本要求】

在做Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）前，將所有標(biāo)本平衡至室溫（15-30℃）。測試前，要將標(biāo)本輕輕旋勻。 

尿液（用于肺炎診斷）

將尿液收集在標(biāo)準(zhǔn)容器中。收集后，如果24小時內(nèi)測定，室溫保存（15-30℃）。此外，將尿液在2-8℃保存或冷凍保存，可存放14天。硼酸可用作防腐劑。

必要時，可將尿液標(biāo)本用防漏容器在2-8℃或冷凍條件下運送。 

腦脊液（用于腦膜炎診斷）

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序收集腦脊液，測試前腦脊液在室溫（15-30℃）只能貯存24小時。冷藏（2-8℃）或冷凍（-20℃）可貯存至1周。 

【檢驗方法】

檢測肺炎球菌肺炎時用尿液標(biāo)本，檢測肺炎球菌性腦膜炎時用腦脊液標(biāo)本。

注：測試液性標(biāo)本時用3滴A試劑。

1．   將病人標(biāo)本和/或液狀對照品放至室溫（15-30℃），輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。

2．   將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標(biāo)本中，*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水，將拭子靠在收集容器的邊上，排去多余的液體。

3．   檢測卡內(nèi)部的右手邊有兩個孔，將拭子插入底部的孔中（拭子孔），穩(wěn)步向前推，使整個拭子頭在上部的孔中可見，不要取出拭子。

4．   垂直持放A試劑瓶，高出檢測卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。

5．   立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯，封閉檢測卡，過15分鐘在窗口判讀結(jié)果。15分鐘后讀取的結(jié)果可能不準(zhǔn)確。然而，有些陽性病人不到15分鐘就出現(xiàn)可見樣品線。

注意：只能使用本試劑盒提供的樣本拭子，不要使用其它拭子。為方便起見，在拭子柄上做了切痕，在閉合檢測卡時可能會將拭子柄折斷。操作時不要使拭子柄從孔中脫出。

【檢驗結(jié)果的解釋】

由于本研究是回顧性的，進(jìn)行測試的各種感染病人的數(shù)量是有限的，且各人的病史不祥，因此，不能排除存在肺炎鏈球菌混合感染的情況。當(dāng)用純培養(yǎng)進(jìn)行測試時（資料如下），這些微生物在NOW^®試驗中均未產(chǎn)生交叉反應(yīng)性。 

全微生物檢測

為了確定Binax NOW^®試驗的分析特異性，收集了144份交叉反應(yīng)物，包括與肺炎有關(guān)的微生物和那些可能作為正常菌群在泌尿生殖道發(fā)現(xiàn)的微生物，以及引起尿道感染的微生物。所有微生物都在10⁶到10⁹CFU/ml用Binax NOW^®試驗進(jìn)行了評估，在144例微生物中有143例無交叉反應(yīng)性，*陽性的微生物是緩和鏈球菌，由于它和Binax NOW^®試驗有共同抗原，交叉反應(yīng)是可預(yù)期的。緩和鏈球菌與心內(nèi)膜炎有關(guān)，而非肺炎，不可能頻繁出現(xiàn)在NOW^®試驗測試人群中⁸。下列生物經(jīng)過測試且結(jié)果為陰性。當(dāng)檢測出不止一株時，用數(shù)字列在括號內(nèi)。 

不動桿菌（4）莢膜組織胞漿菌*（2）普通變形桿菌（2）

腺病毒*產(chǎn)酸克雷白菌 （2）斯氏普羅威登斯菌 糞產(chǎn)堿桿菌

肺炎克雷白菌（3）假單胞菌屬 （7）乳酸桿菌 （5）

呼吸道合胞病毒* 皮炎芽生菌*  嗜肺軍團(tuán)菌 鼻病毒*

百日咳鮑特菌  產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌  沙門菌 （4）卡他布蘭漢菌

Luteus細(xì)球菌 （2）黏質(zhì)沙雷氏菌 白色假絲酵母菌 （3）奧斯陸莫拉菌

鞘胺醇桿菌屬 multivorum 星形假絲酵母菌 摩根菌 金黃色葡萄球菌

厭氧球孢子菌* 堪薩斯分枝桿菌 葡萄球菌 （8）棒狀桿菌屬 （3）

結(jié)核分枝桿菌  寡養(yǎng)單胞菌屬 陰溝腸桿菌 （4）

支原體* （3）咽頰鏈球菌 ◊● avium腸球菌◊ 灰色奈瑟氏菌

牛鏈球菌 ◊ durans腸球菌◊ 淋病奈瑟氏菌

A群鏈球菌● 糞腸球菌 ◊ lactamica奈瑟氏菌 B群鏈球菌◊●

（8）大腸埃希氏菌 （8）腦膜炎奈瑟氏菌 C群鏈球菌◊●

Escherichia hemannii （2）多糖奈瑟菌  F群鏈球菌◊● 黃桿菌屬

（2）淺黃色奈瑟氏菌 G群鏈球菌◊●  陰道加德鈉氏菌  諾卡菌屬*

變異鏈球菌 ◊● 流感嗜血桿菌  （10）巴西副球孢子菌*

副血鏈球菌 ◊● 副流感病毒 *  （2）

血鏈球菌◊● 副流感暑血桿菌（2）

陰道毛滴蟲（2）

*來自CDC的純培養(yǎng)，據(jù)認(rèn)定為高濃度。

◊非A非B鏈球菌（總株數(shù)是16）

●非D群鏈球菌（總株數(shù)是17）

全微生物檢測

除了在前瞻性研究中遇室的細(xì)菌和病毒感染， Binax搜集了一組潛在交叉反應(yīng)物，包括zui常見的細(xì)菌性和病毒性腦膜炎致病因子，在 Binax NOW^®試驗中對濃度范圍從10⁷到10⁸CFU/ml的所有細(xì)菌進(jìn)行了評估，對病毒在大于或等于10⁵I.U./ml水平進(jìn)行了測試。 Binax NOW^®試驗顯示的特異性是100%，所有參加測試的病毒和細(xì)菌產(chǎn)生的結(jié)果均為陰性。

Burkitt^,s 淋巴瘤（Epstein Barr）     嗜血桿菌

柯薩奇A7病毒                非典型（35891）

柯薩奇B3病毒                單純皰疹病毒1型

埃可病毒、                   單純皰疹病毒2型

糞腸球菌                     產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌（19115）

A群流感嗜血桿菌             產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌（19424）

B群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌A血清型

C群流感嗜血桿菌           0  腦膜炎奈瑟氏菌B血清型

D群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌C血清型

E群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌D血清型

F群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌L血清型

流感嗜血桿菌                 口腔鏈球菌（35037）

非典型（51997） 

干擾物質(zhì)

有較高白細(xì)胞（1×10⁴細(xì)胞/ml），紅細(xì)胞（30細(xì)胞/μl）蛋白（3g/dl），膽紅素（100μg/ ml）的腦脊液標(biāo)本用Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測試驗進(jìn)行評價，未發(fā)現(xiàn)對試驗性能有影響。 

重復(fù)性研究

分別在3家實驗室對一組包括陰性、弱陽性、陽性樣本的標(biāo)本單盲編號，用 Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測試驗進(jìn)行單盲研究。3天中對每一樣本進(jìn)行多次測定。270份樣本100%得到了預(yù)期結(jié)果。

【注意事項】

對照拭子需要加6滴A液，病人標(biāo)本需要加3滴A液。

1．  無效結(jié)果，無對照線出現(xiàn)，A液加量不足時會出現(xiàn)。一定要加入足夠量液體，將小瓶垂直持于拭子孔上方1/2-1英寸處，慢慢滴加，使液體自由落下。

2．  僅供體外診斷用。

3．  檢測卡密封在包裝袋中，如果包裝破損或開封，請不要使用。用前從包中取出檢測卡，不要觸摸檢測卡的反應(yīng)區(qū)。

4．  不要使用過期試劑。

5．  不要將不同批號試劑混合使用。

6．  使用試劑盒中提供的拭子。不要使用其他拭子。

7．  盡管制備對照拭子的溶液用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行了滅活，病人樣本、對照品和檢測卡仍應(yīng)視為能傳播疾病的物質(zhì)，遵照已建立的預(yù)防微生物危害的措施做適當(dāng)處理。

8．  此試驗所用尿液標(biāo)本不要求必須是清潔的，因此，用于該試驗的標(biāo)本可能不適于做細(xì)菌培養(yǎng)。

9．  一旦拭子浸入腦脊液標(biāo)本中，樣本不再是無菌的，可能不再適于做細(xì)菌培養(yǎng)。如果腦脊液標(biāo)本要做培養(yǎng)，要么先做培養(yǎng)，要么將腦脊液標(biāo)本分開。

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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
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